如何提高猪疫苗的使用效果

一、如何提高猪疫苗的使用效果

当今，猪病越来越复杂，为了防控疾病，每个猪场确实用了不少疫苗，有的猪场甚至将猪能用的疫苗都用上了，结果造成免疫麻痹，不仅未能使猪群健康，反而导致猪病更为复杂。在此，笔者就如何提高猪疫苗的使用效果进行分析阐述，供参考。

1 科学使用疫苗

1.1 未使用疫苗前， 先对需要使用疫苗的猪群进行摸底

（1）种猪群摸底（含后备猪群）

按种猪的年龄、品种、性别分批采血化验，重点检测猪瘟、猪口蹄疫、猪伪狂犬、猪蓝耳、猪圆环等病毒性疾病的抗体水平， 同时兼顾一些细菌性疾病如猪肺疫、气喘病、萎缩性鼻炎等。并确定合适的免疫时间，据实选用疫苗，不能把每种疫苗都安排使用。

（2）育成猪群的摸底

仔猪出生后，由于母源抗体的保护，仔猪属于被动免疫，要注意母源抗体的消退时间，并据此给仔猪注射疫苗。

对产房仔猪、保育猪、育成猪各按比例进行采血检测分析，落实生长育成猪群什么阶段注射何种疫苗（含病毒性和细菌性）。

1.2 选择适合本场的疫苗

根据本地猪病流行情况及结合本场猪群抗体水平有计划地使用疫苗。如猪瘟、猪口蹄疫、猪伪狂犬、猪蓝耳、猪圆环等病毒性疫苗。有些是不要求接种的，如猪伪狂犬，已净化后就免接种，猪蓝耳病阴性场就不用猪蓝耳苗。至于细菌性疫苗（猪肺疫、猪气喘病等），可选择性使用，如本场长期进行猪群药物保健，细菌性疫苗就少用或不用。

2 使用疫苗注意事项

2.1 疫苗的来源

国家农业部审批注册的正规厂家生产的疫苗，并经过权威部门认可，同时又经过本场实践确认有效果的，方可大批使用，也可用同一种类型、不同厂家生产的育苗进行小群试验对比，最后找出符合本场使用的。一经使用某厂家的疫苗，就应沿用下去，禁止随便更换，否则有可能影响预期效果。

2.2 疫苗的保管与运输

疫苗属于生物药品，宜冷藏和低温保存。一般根据本场用量情况，在使用前1 周购进，到场后存放于专用冰箱（按说明书要求调好冰箱温度），记录疫苗到场时间、批次、厂家、类型、有效期等。同时还须用温度计检测一下运输疫苗的保存箱的温度，作为疫苗贮存的依据。

2.3 疫苗的接种时间

疫苗的接种时间是根据本场检测结果和近期流行的疾病来确定的。

疫苗的接种时间又分为常规接种和紧急接种。常规接种的时间是根据本场多年检测摸索及实践制定的。而紧急接种，就是在某种疾病流行期间，紧急接种某种疫苗，从而达到迅速扑灭疫情的目的。

2.4 疫苗的使用方法

疫苗应按厂家使用说明现配现用，在规定时间内用完，否则疫苗效价有变，影响猪群免疫效果。

二、猪血清分离，如何得到更多的量

我以前经常做的事，也查过相关文献。血清分离，看你的要求，对于溶血程度，是否要求无菌等等，看你那的有要求什么的；用我的经历举例，我们的要求是尽可能无菌或减少污染，除了超净工作台之类的，我说通用的；一、通过自然凝固的方法：1、和“海棠”说的差不多，但是细节来说，对于血液自然分离来说，选择呈装的材质最好是玻璃材质，它的分离效果要比塑料的材质好；2、室外的温度不能过低，最好是25-30℃，因为由于血液体内的温度是37℃，到体外室温低的话，由于热胀冷缩，细胞破裂多，溶血后，血红素溢出会溶血增加；3、有条件的话，而且容器也不大的情况下，可以放置恒温箱中30分钟-1.5个小时，如果能倾斜30度左右放置，效果更好，但是最好不要超过2个小时，不然溶血也会增加；4、没有条件，可以室温倾斜放置过夜，第二天同样能得到淡黄色的血清；5、为了得到更多的血清，这个时候我会移出血清，然后剩余的血块再3000rpm离心15-20分钟，这样还能得到一点；然后剩余的血块再放置在4℃冰箱再过夜，还能获得一些血清，但是这个时候的血清已经是溶血的血清了；二、通过离心的方法：（加抗凝剂）1、高速离心机（3000-12000rpm)，首次离心不宜超过3000rpm，因为容易溶血，我一般2000rpm15分钟，因为我要除了要血浆外，还要完整的血细胞；2、血浆再7000rpm，就能获得最理想的血浆量了；备注：我的呈装的容器是250ml葡萄糖瓶，因为需要无菌，所以都是分装后，然后上丁基胶塞离心或者自然分离；还有，一般情况下，自然析出的血清一般占总血的量35-45%；但是血浆的话，血浆占总血液体积的60-70%，量很可观。

三、被给猪采血的针扎到了膀子，很深，到骨头

有被动物弄出血的也应该打狂犬疫苗！虽然针头没有沾到血，但也许是肉眼看不见的。

四、猪血液DNA提取步骤

高中：

原理：

1.析出溶解在NaC1溶液中的DNA。

2.用冷酒精提取出含杂质较少的DNA。

3.DNA在沸水浴时被二苯胺染成蓝色。

方法步骤：

1．提取细胞核物质：顺时针方向搅拌，稍快，稍重。5min

2．溶解DNA：

3．析出含DNA的黏稠物：蒸馏水300mL，逆时针方向搅拌，缓慢

4．过滤：取黏稠物

5．再溶解：顺时针方向搅拌，较慢。3min

6．过滤：取滤液。

7．提取出含杂质较少的DNA，逆时针方向搅拌，稍慢。5min

8．DNA的鉴定：沸水浴5min

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DNA提取分为三个基本步骤，每个步骤的具体方法可根据样品种类、影响提取的物质以及后续步骤的不同而有区别。

利用研磨或者超声破碎细胞，并通过加入去污剂以除掉膜脂。

加入蛋白酶，醋酸盐沉淀，或者酚/氯仿抽提，以除掉细胞内的蛋白，如与DNA结合的组蛋白。

将DNA在冷乙醇或异丙醇中沉淀，因为DNA在醇中不可溶而黏在一起，这一步也能除掉盐分。

另外，目前也有利用吸附过柱的方法提取DNA的商业化试剂盒。

2.细胞的破碎

细菌有坚硬的细胞壁，首先要破碎经胞。方法有三种;①机械方法：超声波处理法、研磨法、匀浆法;②化学试剂法：用SDS处理细胞;③酶解法：加入溶菌酶或蜗牛酶，都可使细胞壁破碎。

3.DNA提取的几种方法

(1).浓盐法

A.利用RNA和DNA在电解溶液中溶解度不同，将二者分离，常用的方法是用1M氯纳提取化钠抽提,得到的DNP粘液与含有少量辛醇的氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将DNA钠盐沉淀出来.

B.也可用0.15MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白.

两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.

C.以稀盐酸溶液提取DNA时,加入适量去污剂,如SDS可有助于蛋白质与DNA的分离。在提取过程中为抑制组织中的DNase对DNA的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.通常用.15MNaCL,0.015M柠檬钠,并称SSC溶液,提取DNA.（2）.阴离子去污剂法;用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA.由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA

（3）.苯酚抽提法：苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含DNA的水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀DNA。此时DNA是十分粘稠的物质，可用玻璃漫漫绕成一团，取出。此法的特点是使提取的DNA保持天然状态

（4）.水抽提法:利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA，然后将沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66%，80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得DNA样品.此法提取的DNA中蛋白质含量较高,故一般不用.为除蛋白可将此法加以改良,在提取过程中加入SDS.